杂交 （1） 盛有2×ssc的塑料盘同，将干烤的滤膜飘浮在液面上，浸湿5分钟。（2） 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起，放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿，放---于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中，原位杂交检测，应缓缓摇动滤膜，防止它们粘在一起。（3） 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去---碎片，以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。（4） 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中，在适宜温度（即在水溶液中杂交时用68℃，而在50%---胺中杂交时用42℃）下，预杂交1-2小时。
菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜
（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，原位杂交，让滤膜留于原处2-3分钟。
（2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤（1）。
（3） 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。
（4） 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。
（5） 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，原位杂交服务，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定dna。
（6） 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。
fish是原位杂交技术大家族中的一员，因其所用探针被荧光物质标记（间接或直接）而得名，该方法在80年代末 被发明，现已从实验室逐步进入---诊断领域。基本原理是荧光标记的---探针在变性后与已变性的靶---在退火 温度下复性；通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象（即维持其原位）的前提下对靶---进行分析。dna荧光标记探针是其中常用的一类---探针。利用此探针可对组织、细胞或染色体中的dna进行染色体及基因水平 的分析。荧光标记探针不对环境构成污染，灵敏度能得到保障，可进行多色观察分析，因而可同时使用多个探针，缩 短因单个探针分开使用导致的周期过程和技术障碍。
原位杂交-武汉贝科新肽科技公司-原位杂交服务由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司是湖北 武汉 ,化学试剂的见证者，多年来，公司贯彻执行科学管理、---发展、诚实守信的方针，满足客户需求。在贝科新肽---携全体员工热情欢迎---垂询洽谈，共创贝科新肽美好的未来。
联系我们时请一定说明是在100招商网上看到的此信息，谢谢！
本文链接：https://tztz352388.zhaoshang100.com/zhaoshang/279709214.html
关键词：
滇公网安备 53011202000392号