荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,fish)是在20世纪80年代末在性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性分子细胞遗传技术,ish,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子(reporter molecule)结合,杂交后再通过细胞化学过程连接上荧光染料.fish的基本原理是将dna(或rna)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或dna纤维切片上,再用与荧光素分子偶联的单与探针分子特---结合来检测dna序列在染色体或dna纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.fish具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点,不但能显示中期分裂相,还能显示于间期核.同时在荧光原位杂交基础上又发展了多彩色荧光原位杂交技术和染色质纤维荧光原位杂交技术.

在ishh,整个实验周期是比较长的,实验程序也比较繁杂,原位杂交,而杂交在ishh整个实验中可被认为是“短兵相接”的一步。杂交前的一切准备工作如增加组织通透性都是为了在杂交这一步骤中---探针能进入细胞或组织与其内的靶核苷酸相结合。因此,gish,杂交是ishh中关键的而且是重要的一个环节。杂交是将杂交液滴于切片组织上,加盖硅化的盖玻片,防止孵育过程中的高温(50℃左右)导致杂交液的蒸发。为---杂交所需的湿润环境,植物组织原位杂交,可将其放在盛有少量5×ssc或2×ssc(standard saline citrate, ssc)溶液的硬塑料盒中进行孵育。杂交液的成分和预杂交液基本相同,所不同的是加入了标记的---探针和---葡聚糖。

根据---探针标记物的种类分别进行自显影或利用酶检测系统进行不同显色处理。细胞或组织的原位杂交切片在显示后均可进行半定量的测定,如自显影可利用人工或计算机辅助的图象分析检测仪(computer-assisted image ---ysis)检测银粒的数量和分布的差异。非性---探针杂交的细胞或组织可利用酶检测系统显色,然后利用显微分光光度计或图像分析仪对不同类型和数量的---的显色强度进行检测。

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