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原位杂交：

　　原位杂交是指用特定探针定位、检测dna、rna的一种有效的实验方法，通过把特点序列客隆到特殊载体上，通过转录酶反转一条天然的rna探针，将探针和切片样品进行杂交，通过一系列显色方法，gish，来确定rna或者dna表达区域；本中心原位杂交探针采用的是第高辛和生物素标记，灵敏度和同位素相当。 我们采用roche标记及显色试剂盒，gish/ish/fish按照探针进行收费，每个试剂盒每条探针可以杂交60-80张玻片，收费为1万5千元，gish杂交因需要加抗淬灭剂每条探针收费为1万9千元。量---！

原位杂交技术方法大致可分为：1.杂交前准备，包括固定、取材、玻片和组织的处理，如何增强---探针的穿透性、减低背景染色等；2.杂交；3.杂交后处理；4.显示（visualization）：包括性自显影和非性标记的显色。固定原位杂交组织化学技术在固定剂的应用和选择上应---到三个方面：保持细胞结构，限度地保持细胞内dna或rna的水平；使探针易于进入细胞或组织。dna是比较稳定的，mrna是相对稳定的但易为酶合成和降解。rna却绝然不同，非常容易被降解。因此，对于dna的定位来说，固定剂的种类和浓度并不十分重要。相反，在rna的定位上，如果要使rna的降解减少到低限度，那么，不仅固定剂的种类浓度和固定的时间十分重要，而且取材后应尽快予以冷冻或固定。

把滤膜放在纸巾上于室温晾干后，把滤膜（编号面朝上）放在一张保鲜膜上，并在保鲜膜上作几个不对称的标记，以使滤膜与性自显影片位置对应。

用第二张保鲜膜盖住滤膜。加光片并加上增感屏于-70℃---12-16小时。

底片显---，在底片上贴一张透明硬纸片。在纸上标记阳性杂交信号的位置，同时在不对称分布点的位置上作出标记。可从底片上取下透明纸，通过对比纸上的点与琼脂上的点来鉴定阳性菌落。

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