启动子筛选-贝科新肽科技公司

用水稻原生质体进行亚细胞定位时，为什么不拍摄叶绿体的自发荧光？

经测验，启动子筛选，使用水稻黄化苗制备原生质体，载体转化效率及基因表达强度较高，而黄化苗中叶绿体较少，因此水稻原生质体定位拍照时，除非与叶绿体共定位，否则不拍摄叶绿体的自发荧光。

为什么要提供gfp空载的对照图片？

（1）作为整个实验过程中的操作参照，可排除因实验操作而导致目的基因没有荧光信号的影响。

（2）作为载体体系的参照，确认构建载体时所使用的载体是可正常表达荧光蛋白的。

什么是亚细胞定位？首先我们来看什么是亚细胞。细胞是构成生物体的基本结构单位和功能单位，是生命的物质基础。细胞的结构复杂精巧且高度有序，亚细胞是比细胞结构更细化的结构，根据功能和空间分布的不同，细胞内部可以进一步划分为不同的细胞区域或细胞器，即亚细胞，其结构一般只有在电子显微镜(ems)下才能看到。它们的特点是在细胞内，功能和空间相互隔离，又共同协调维持完整的细胞功能。在一定范围内，亚细胞结构等同于细胞器，不过像细胞膜虽然可以叫亚细胞结构，但不是细胞器。每种亚细胞结构中都存在一组特定的蛋白质，亚细胞结构为这些蛋白质行使功能提供了相对独立的生命活动场所。同时也只有在相同或相近的亚细胞位置上蛋白质间才会有相互作用。

原理简介

gfp、rfp等荧光蛋白因其的荧光性质和灵敏性，常作为报告基因研究并分析基因产物在细胞中的定位和相互作用等。将目标蛋白与荧光蛋白的n端或者c端融合，通过瞬时转化技术或稳定遗传转化技术，使得该融合蛋白在受体材料细胞内表达，目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器，通过显微镜观察荧光蛋白在细胞内显示的位置，确定目标蛋白的位置，从而确定目标蛋白的亚细胞定位情况。

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