同一样本可以多次做原位杂交实验吗?
一般情况下,如果操作没有得到理想的结果,是可以将探针洗涤然后进行再次的杂交的。如果使用的是直标型探针,还可以使用不同探针对同一样本进行反复杂交。针对不同的样本,处理方法略有不同。
原位杂交实操中哪些因素比较重要?
重要的因素:温度、光照、湿度和试剂的ph值。温度和湿度直接影响着探针和目标dna的杂交效率;光照影响着荧光染料的强度,所以探针要避光保存,原位杂交技术服务,其已经杂交的片子可用防荧光淬火剂封片且避光保存;各种试剂ph也要达到要求,这也直接关系到原位杂交的稳定性。
在原位杂交过程中,需要使用标记的---探针,通常是在性核素或非性物质中标记的。这些探针可以通过不同的方式制备,例如从已知序列的dna或rna制备,或者通过使用生物信息学方法设计和合成新的探针。
在进行原位杂交时,原位杂交技术,细胞或组织需要固定在适当的支持物上,原位杂交技术咨询,例如载玻片。然后,探针与细胞或组织中的dna或rna进行杂交,通常是在加热条件下进行的。接下来,通过洗涤和显影步骤去除未结合的探针和信号增强剂,后用显微镜观察杂交信号的位置。

预杂交
1)每个管中置换成大约300ulhyb-溶液,原位杂交,60℃水浴5分钟,避免振荡。
2)用等体积的hyb+取代hyb-。
3)60℃水浴,预杂交4小时以上。
杂交
1)吸去预杂交的hyb+,加上100ul已加入探针的hyb+溶液(探针浓度约为1ng/ul)..
2)60℃ 温浴过夜。
注:杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等,温度越低,探针结合越好,温度越高,背景越小。
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