荧光原位杂交技术-原位杂交-贝科新肽科技公司

预杂交

1）每个管中置换成大约300ulhyb－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。

2）用等体积的hyb＋取代hyb－。

3）60℃水浴，荧光原位杂交技术，预杂交4小时以上。

杂交

1）吸去预杂交的hyb＋，加上100ul已加入探针的hyb＋溶液（探针浓度约为1ng/ul）..

2）60℃ 温浴过夜。

 注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。

　组织原位杂交(tissue in situ hybridization），即原位杂交组织化学技术和原位杂交细胞化学技术

　　原位杂交技术的基本原理

　　利用---分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。

　　1.两条核苷酸单链片段，原位杂交检测，在适宜的条件下，通过氢键结合，形成dna-dna、dna一rna或rna一rna双键分子

　　2.应用带有标记的（有性同位素，如3h、35s、32p，荧光素、生物素、等非性物质)dna或rn---段作为---探针，与组织切片或细胞内待测---(rna或dna）片段进行杂交

　　3.用自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的mrna或dna的存在与定位

　　用原位杂交术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。

　　此方法有---的敏感性和特---，可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。