原位杂交(in situ hybridazation)
固定
收集斑马鱼的胚胎,原位杂交,在holfretor水中培养,到达所需要的发育时期时,用蛋白酶去除卵膜,用4%---固定,原位杂交服务,在4℃保存,原位杂交技术,二十四小时后用50%2%---溶液洗,然后换成,在-20c 保存,待用(两天和两天以上的胚胎需要用处理,去除色素。或者使用---锍脲稀溶液培养,可阻断色素的形成)

在原位杂交过程中,需要使用标记的---探针,通常是在性核素或非性物质中标记的。这些探针可以通过不同的方式制备,例如从已知序列的dna或rna制备,植物原位杂交,或者通过使用生物信息学方法设计和合成新的探针。
在进行原位杂交时,细胞或组织需要固定在适当的支持物上,例如载玻片。然后,探针与细胞或组织中的dna或rna进行杂交,通常是在加热条件下进行的。接下来,通过洗涤和显影步骤去除未结合的探针和信号增强剂,后用显微镜观察杂交信号的位置。

dna 探针为原位杂交提供较高的灵敏度。与rna探针相比,dna探针与靶mrna 分子的杂交强度较弱,因此在杂交后的洗涤中不应使用甲醛。
探针特------。如果已知细胞中mrna或dna的确切核苷酸序列,则可据此设计高度的互补探针。如果超过 5% 的碱基对不互补,那么探针只能与靶序列发生轻度杂交。这意味着,探针更容易在洗涤和检测步骤中被洗去,可能无---确检测。
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