基因组原位杂交技术基因组原位杂交(genome in situ hybridization,gish)技术是20世纪80年代末发展起来的一种原位杂交技术。它主要是利用物种之间dna同源性的差异,用另一物种的基因组dna以适当的浓度作封阻,在靶染色体上进行原位杂交。gish技术初应用于动物方面的研究(pinkel et al.,1986),gish,在植物上早应用于小麦和栽培种的鉴定(余舜武等 2001;王文奎等 2000)。

预杂交
1)每个管中置换成大约300ulhyb-溶液,60℃水浴5分钟,ish,避免振荡。
2)用等体积的hyb+取代hyb-。
3)60℃水浴,预杂交4小时以上。
杂交
1)吸去预杂交的hyb+,原位杂交,加上100ul已加入探针的hyb+溶液(探针浓度约为1ng/ul)..
2)60℃ 温浴过夜。
注:杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等,温度越低,原位杂交试剂,探针结合越好,温度越高,背景越小。
fish技术的基本步骤包括探针制备、样品预处理、探针与样品的杂交、信号检测和图像分析等。在探针制备过程中,使用荧光标记物代替同位素标记物来标记探针。在样品预处理过程中,细胞或组织的固定、裂解和去除非特---蛋白质等操作都是---的,以提高探针与目标序列的亲和力和特---。在探针与样品的杂交过程中,探针与样品中的目标序列进行互补性杂交,形成可检测的荧光信号。在信号检测和图像分析过程中,使用高灵敏度荧光显微镜检测荧光信号并获取高分辨率的细胞图像。

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