原位杂交是在分子生物学领域应用---广泛的实验技术之一,原位杂交,是在研究生物体发育过程中的一种---重要的分子遗传学的研究方法。其英文名为in situ hybridization,其中in situ为拉丁文,植物原位杂交,原义是in its natural ition. 字面的意思理解就是说在其原来的天然的位置处杂交。原位杂交主要是基于以下这个主要原理:单链的dna或者rna只要他们的序列是互补的,即符合at,cg的碱基配对原则,那么这样的两条---链之间(dna-dna,dna-rna,rna-rna)就可以形成一个稳定的杂交复合体。

植物原位杂交在遗传育种方面的应用主要包括:
异源染色质及多种染色体畸变检测:通过远缘杂交把有用遗传物质基因的异源染色质渐渗到植物中。如带有几种抗病基因的黑麦1r染色体已被整合到许多高产的小麦品种中。原位杂交技术则是鉴定外源染色体(质)的有效手段。
基因组印记研究:基因组印记是指一个基因的两条染色体上的dna序列存在差异。通过植物原位杂交技术,可以检测到基因组印记的存在和分布,从而帮助确定基因组的进化、遗传和功能特征。
菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜
(1) 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,将滤膜放到小洼上,展平保鲜膜,使滤膜均匀湿润,原位杂交服务,让滤膜留于原处2-3分钟。
(2) 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜,用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤(1)。
(3) 吸干滤膜,将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4)的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜,再重复一次该步骤。
(4) 吸干滤膜,把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4)的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜,转移到一张干的滤纸上,置于室温20-30分钟,使滤膜干燥。
(5) 将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,固定dna。
(6) 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。
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