这一原理对于检测一个特异的mrna在某一种生物体，或者某些组织切片、单个细胞里具体表达位置非常有用。该技术早应用于60年代末期，由于---分子杂交的特---高，并可定位，因此该技术已被广泛应用，例如与细胞内rna进行杂交以观察该组织细胞中特定基因表达水平。原位杂交能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其他成分的影响，gish，因此对于那些细胞数量少且散在于其他组织中的细胞内dna或rna研究更为方便；同时由于原位杂交不需要从组织中提取---，对于组织中含量极低的靶序列有---的敏感性，并可完整地保持组织与细胞的形态，更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。
菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜
（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。
（2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤（1）。
（3） 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。
（4） 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。
（5） 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定dna。
（6） 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。
dna 探针为原位杂交提供较高的灵敏度。与rna探针相比，dna探针与靶mrna 分子的杂交强度较弱，因此在杂交后的洗涤中不应使用甲醛。
探针特------。如果已知细胞中mrna或dna的确切核苷酸序列，则可据此设计高度的互补探针。如果超过 5% 的碱基对不互补，那么探针只能与靶序列发生轻度杂交。这意味着，探针更容易在洗涤和检测步骤中被洗去，可能无---确检测。
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