荧光原位杂交(fish)技术具有以下优点:
高特---:荧光探针的合成是定向的,---了杂交过程的特---,可以有效地降低非特---杂交和背景干扰。
高灵敏度:荧光信号的检测比性信号的检测更灵敏,原位杂交服务,可以检测出低拷贝数的dna序列,甚至可以检测单个基因序列。
快速简便:fish技术操作简便,杂交过程可以在数小时或数天内完成,而且不需要过于复杂的设备,便于在实验室开展。
---原位杂交可根据其检测物而分为细胞内原位杂交和组织切片内原位杂交;根据其所用探针及所要检测---的不同又可分为dna-dna, rna-dna, rna-rna杂交。但不论哪种杂交都必须经过组织细胞的固定,原位杂交,预杂交,原位杂交技术,杂交,冲等一系列洗步骤及自显影或酶法显色以显示杂交结果。
我们在这儿介绍的是整胚原位杂交,不同于一般的在载片上对细胞和组织切片进行探针杂交及检测的原位杂交,
原位杂交(in situ hybridazation)
固定
收集斑马鱼的胚胎,在holfretor水中培养,到达所需要的发育时期时,用蛋白酶去除卵膜,用4%---固定,在4℃保存,二十四小时后用50%2%---溶液洗,荧光原位杂交技术,然后换成,在-20c 保存,待用(两天和两天以上的胚胎需要用处理,去除色素。或者使用---锍脲稀溶液培养,可阻断色素的形成)

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