双分子荧光互补-武汉贝科新肽科技公司

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    2023-10-26

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为什么有的基因定位结果与预想的不一致?

对于一个特定的定位载体,只要荧光表达较好,其定位结果是确定的,不会随人为意愿或操作而改变。至于有时候和预想的结果不一样,可能和蛋白本身、选择的表达载体以及荧光蛋白融合方式等有关。

为什么有的普通定位结果出来后无法准确判断其定位位置?

细胞中的细胞器复杂且多样,除一些常见的、特征比较明显的细胞器外,有些细胞器在激光共---下形状比较相似,双分子荧光互补,例如:线粒体、---化物酶体、高尔基体等细胞器,它们的荧光表达形状可能都是点状,因此不易区分。这时可以结合基因的其他功能研究来判断其可能表达的位置。另外,蛋白表达本身也是一个复杂的过程,涉及到多个合成场所及转运过程,自身表达情况可能比较复杂,因此不易判断具体的表达位置。



为什么有的共定位图片中叶绿体通道是玫红色?

在拟南芥、、玉米、大麦、小麦等材料中,种植培养苗子时是正常接受光照的,叶片中含有大量叶绿体,而叶绿素在640nm左右的激发光下可产生红色的自发荧光。当在这些含叶绿体较多的受体材料中做共定位实验时,共定位marker一般为红色荧光(在560nm左右的激发光下),实验及共---拍摄时两个波长通道的荧光互不影响,但视野下看着比较混淆,尤其叠加后二者不易分清,因此只是在颜色显示---叶绿体自发荧光设置为玫红色,以显示和共定位marker的区别。





gfp是绿色荧光蛋白,在扫描共---显微镜的激光照射下会发出绿色荧光,从而可以地定位蛋白质的位置。绿色萤光蛋白(gfp)是一个由约238个---酸组成的蛋白质,从蓝光到紫外线都能使其激发,发出绿色荧光。通过基因工程技术,绿色萤光蛋白(gfp)基因能转进不同物种的基因组,在后代中持续表达,并且能根据启动子特---地表达。

使用gfp必须构建融合蛋白载体,并在转染之后有效表达。这样,若在荧光显微镜下看到细胞内某一部位存在gfp信号,说明和gfp融合的蛋白也存在于该部位,这样就达到了确定某物质亚细胞定位的目的。



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