原位杂交检测-贝科新肽-原位杂交

以菌落原位杂交为例：对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。

将少数菌落转移到纤维素滤膜上

（1） 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

（2） 用无菌---将各个菌落先转移至滤膜上，再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种（或打点）。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后，在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

（3） 倒置平板，于37℃培养至划线的---菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

（4） 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

（5） 用parafilm膜封好主平板，倒置贮放于4℃，荧光原位杂交，直至获得杂交反应的结果。

（6） 裂解---，按本段下面所述方法，使释放的dna结合于纤维素滤膜。

荧光原位杂交（fish）技术具有以下优点：

高特---：荧光探针的合成是定向的，---了杂交过程的特---，原位杂交技术，可以有效地降低非特---杂交和背景干扰。

高灵敏度：荧光信号的检测比性信号的检测更灵敏，原位杂交检测，可以检测出低拷贝数的dna序列，原位杂交，甚至可以检测单个基因序列。

快速简便：fish技术操作简便，杂交过程可以在数小时或数天内完成，而且不需要过于复杂的设备，便于在实验室开展。