原位杂交-武汉贝科新肽-动物组织原位杂交

预杂交

1）每个管中置换成大约300ulhyb－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。

2）用等体积的hyb＋取代hyb－。

3）60℃水浴，预杂交4小时以上。

杂交

1）吸去预杂交的hyb＋，加上100ul已加入探针的hyb＋溶液（探针浓度约为1ng/ul）..

2）60℃ 温浴过夜。

 注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，原位杂交，探针结合越好，温度越高，荧光原位杂交，背景越小。

原位杂交是一种---的技术，它使研究人员能够在细胞或组织中确定特定dna或rna序列的位置。这项技术在基础研究和---应用中都有广泛的应用。通过了解原位杂交的基本原理和实验步骤，研究人员可以---地理解其功能并应用于他们的研究中。

原位杂交技术的定义和基本原理原位杂交技术是一种基于---分子杂交原理，将标记的---探针与生物组织或细胞中的dna或rna进行特---结合，从而在细胞水平上检测目标---序列分布的技术。原位杂交技术的基本原理是利用dna或rna的互补性，通过加热或化学反应使探针与组织或细胞中的目标---序列形成双链复合物，进而实现目标---序列的定位。

原位杂交技术方法大致可分为：1.杂交前准备，包括固定、取材、玻片和组织的处理，如何增强---探针的穿透性、减低背景染色等；2.杂交；3.杂交后处理；4.显示（visualization）：包括性自显影和非性标记的显色。固定原位杂交组织化学技术在固定剂的应用和选择上应---到三个方面：保持细胞结构，限度地保持细胞内dna或rna的水平；使探针易于进入细胞或组织。dna是比较稳定的，原位杂交检测，mrna是相对稳定的但易为酶合成和降解。rna却绝然不同，动物组织原位杂交，非常容易被降解。因此，对于dna的定位来说，固定剂的种类和浓度并不十分重要。相反，在rna的定位上，如果要使rna的降解减少到低限度，那么，不仅固定剂的种类浓度和固定的时间十分重要，而且取材后应尽快予以冷冻或固定。



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