亚细胞定位操作步骤
1、通过一些在线网站预测亚细胞定位
2、亚细胞定位载体构建
（1）引物设计：利用引物设计软件，根据pegp-mcs-n1或pegp-c1-mcs的酶切位点设计目的基因引物。
（2）载体构建：将pcr产物酶切后插入pegp-mcs-n1或pef-c1-mcs，得到表达目的基因与egp融合蛋白质的真核表达载体。
3、细胞转染
当细胞生长到对数生长期时，接种到共---显微镜的玻璃底培养皿（35mm petri dish，10 mm microwell）中，培养过夜。当细胞贴壁率达到30%~50%时，将融合绿色荧光蛋白gfp的重组载体质粒和目标细胞器质粒共转染细胞。37℃孵箱培养24~72h。
4、激光扫描共---显微镜观察
将上述细胞分别在24、36、48、72h的时间点，根据实验需求选择对应激发波长（常用405nm、488nm和561nm），使用共---显微镜观察，亚细胞定位方法，采取图像。
原理简介
gfp、rfp等荧光蛋白因其的荧光性质和灵敏性，常作为报告基因研究并分析基因产物在细胞中的定位和相互作用等。将目标蛋白与荧光蛋白的n端或者c端融合，通过瞬时转化技术或稳定遗传转化技术，洋葱亚细胞定位，使得该融合蛋白在受体材料细胞内表达，目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器，通过显微镜观察荧光蛋白在细胞内显示的位置，确定目标蛋白的位置，亚细胞定位，从而确定目标蛋白的亚细胞定位情况。
内质网
内质网是细胞中的一个复杂网络，亚细胞定位公司，它负责合成和转运蛋白质。为了定位内质网，我们可以使用一种名为gfp-hdel的蛋白质来标记它们。gfp-hdel是一种带有绿色荧光的蛋白质，它可以与内质网上的hdel序列结合。在洋葱细胞中，内质网通常位于细胞的中央或周围。
高尔基体
高尔基体是细胞中的另一个复杂网络，它负责合成和转运蛋白质。为了定位高尔基体，我们可以使用一种名为fm4-64的化合物来标记它们。fm4-64可以穿过细胞膜并进入高尔基体，从而发出红色荧光。在洋葱细胞中高尔基体通常位于细胞的中央或周围。
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