原位杂交-武汉贝科新肽-荧光原位杂交技术

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    2023-11-3

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荧光原位杂交(fish)技术具有以下优点:

可多重染色:利用不同的荧光染料标记不同的探针,可以实现多重荧光原位杂交,从而同时检测多个序列,提高实验效率了。

高度---性和性:fish技术不仅可以用于研究已知基因或序列的染色体定位,还可以用于未基因或遗传标记及染色体畸变的研究,在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。



基因组原位杂交技术基因组原位杂交(genome in situ hybridization,gish)技术是20世纪80年代末发展起来的一种原位杂交技术。它主要是利用物种之间dna同源性的差异,用另一物种的基因组dna以适当的浓度作封阻,原位杂交技术咨询,在靶染色体上进行原位杂交。gish技术初应用于动物方面的研究(pinkel et al.,1986),荧光原位杂交技术,在植物上早应用于小麦和栽培种的鉴定(余舜武等 2001;王文奎等 2000)。



预杂交

1)每个管中置换成大约300ulhyb-溶液,60℃水浴5分钟,避免振荡。

2)用等体积的hyb+取代hyb-。

3)60℃水浴,预杂交4小时以上。

杂交

1)吸去预杂交的hyb+,原位杂交,加上100ul已加入探针的hyb+溶液(探针浓度约为1ng/ul)..

2)60℃ 温浴过夜。

 注:杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等,温度越低,探针结合越好,温度越高,背景越小。



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