什么是亚细胞定位？首先我们来看什么是亚细胞。细胞是构成生物体的基本结构单位和功能单位，是生命的物质基础。细胞的结构复杂精巧且高度有序，亚细胞是比细胞结构更细化的结构，根据功能和空间分布的不同，细胞内部可以进一步划分为不同的细胞区域或细胞器，启动子筛选，即亚细胞，其结构一般只有在电子显微镜(ems)下才能看到。它们的特点是在细胞内，功能和空间相互隔离，又共同协调维持完整的细胞功能。在一定范围内，亚细胞结构等同于细胞器，不过像细胞膜虽然可以叫亚细胞结构，但不是细胞器。每种亚细胞结构中都存在一组特定的蛋白质，亚细胞结构为这些蛋白质行使功能提供了相对独立的生命活动场所。同时也只有在相同或相近的亚细胞位置上蛋白质间才会有相互作用。
亚细胞定位操作步骤
1、通过一些在线网站预测亚细胞定位
2、亚细胞定位载体构建
（1）引物设计：利用引物设计软件，根据pegp-mcs-n1或pegp-c1-mcs的酶切位点设计目的基因引物。
（2）载体构建：将pcr产物酶切后插入pegp-mcs-n1或pef-c1-mcs，得到表达目的基因与egp融合蛋白质的真核表达载体。
3、细胞转染
当细胞生长到对数生长期时，接种到共---显微镜的玻璃底培养皿（35mm petri dish，10 mm microwell）中，培养过夜。当细胞贴壁率达到30%~50%时，将融合绿色荧光蛋白gfp的重组载体质粒和目标细胞器质粒共转染细胞。37℃孵箱培养24~72h。
4、激光扫描共---显微镜观察
将上述细胞分别在24、36、48、72h的时间点，根据实验需求选择对应激发波长（常用405nm、488nm和561nm），使用共---显微镜观察，采取图像。
为什么有的共定位图片中叶绿体通道是玫红色？
在拟南芥、、玉米、大麦、小麦等材料中，种植培养苗子时是正常接受光照的，叶片中含有大量叶绿体，而叶绿素在640nm左右的激发光下可产生红色的自发荧光。当在这些含叶绿体较多的受体材料中做共定位实验时，共定位marker一般为红色荧光（在560nm左右的激发光下），实验及共---拍摄时两个波长通道的荧光互不影响，但视野下看着比较混淆，尤其叠加后二者不易分清，因此只是在颜色显示---叶绿体自发荧光设置为玫红色，以显示和共定位marker的区别。
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