基因法转化洋葱表皮细胞：
分别用70%---和灭菌蒸馏水清洗金粉（直径为1 μm），加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液，启动子筛选，取100 μl 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中，边振荡边加入10 μl pcambia2301-gamyb2-gfp质粒，逐步加入40 μl 0.1 mol·l-1 亚精胺和100 μl2.5 mol·l-1 cacl2，振荡混匀。基因gds-80轰击时---气罐的气压为1 300 psi，取10 μl dna 包裹好的微粒悬浮液加到基因中央，进行轰击，之后放置25℃避光过夜培养，使用confocallaser激光共---显微镜观察。
为什么有的共定位图片中叶绿体通道是玫红色？
在拟南芥、、玉米、大麦、小麦等材料中，种植培养苗子时是正常接受光照的，叶片中含有大量叶绿体，而叶绿素在640nm左右的激发光下可产生红色的自发荧光。当在这些含叶绿体较多的受体材料中做共定位实验时，共定位marker一般为红色荧光（在560nm左右的激发光下），实验及共---拍摄时两个波长通道的荧光互不影响，但视野下看着比较混淆，尤其叠加后二者不易分清，因此只是在颜色显示---叶绿体自发荧光设置为玫红色，以显示和共定位marker的区别。
构建亚细胞定位载体时，gfp融合位置为什么有n端、c端之分？
若序列中存在信号肽，则构建载体时需避开这一端来融合荧光蛋白。需注意不同的融合方式可能会得到不同的定位结果，例如融合在荧光蛋白n端的目标蛋白一般无法得到---化物酶体的定位结果；融合在荧光蛋白c端的目标蛋白一般无法得到线粒体、质体的定位结果。
为什么不同的受体材料有时得到的定位结果不一样？
不同物种的细胞在翻译表达基因时，其表达模式和影响因子不同。受物种差异的影响，同一个载体在不同的受体材料中表达的位置可能不同，因此建议实验时尽可能选用与目的基因来源相近的受体材料进行表达。
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