






洋葱亚细胞定位的方法包括但不限于以下三种:
荧光法:利用抗原与的特---结合,在细胞内产生荧光标记,从而确定细胞内抗原的分布位置。
gfp融合蛋白表达法:将目的蛋白与绿色荧光蛋白(gfp)融合,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达位置。
亚细胞分离法:通过一定的物理或化学方法,将细胞进行破碎,然后通过离心、密度梯度离心等方法将细胞器分离出来,再对分离出来的各个细胞器进行成分和结构分析。
为什么有的共定位图片中叶绿体通道是玫红色?
在拟南芥、、玉米、大麦、小麦等材料中,种植培养苗子时是正常接受光照的,叶片中含有大量叶绿体,而叶绿素在640nm左右的激发光下可产生红色的自发荧光。当在这些含叶绿体较多的受体材料中做共定位实验时,共定位marker一般为红色荧光(在560nm左右的激发光下),实验及共---拍摄时两个波长通道的荧光互不影响,但视野下看着比较混淆,尤其叠加后二者不易分清,因此只是在颜色显示---叶绿体自发荧光设置为玫红色,以显示和共定位marker的区别。

为什么不先对基因做预测,在预测的结果上直接做共定位?
不同的预测网站有不同的计算方法,同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的,双分子荧光互补,对于不清楚可能定位在哪里的基因,一般先做普通定位,根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。
适用于什么实验场景?
(1)基因功能研究,文章里总少不了这一项。
(2)研究蛋白相互作用,与酵母双杂实验结果相互验证。
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