






原位杂交技术在其他生物领域也有广泛的应用,例如:
动物行为学研究:在动物行为学中,原位杂交技术可以用于检测动物行为与基因表达之间的关系。例如,通过比较不同行为状态下动物脑组织中基因表达的差异,可以揭示特定基因对动物行为的影响。
生物技术应用:原位杂交技术在生物技术领域也有广泛应用,例如在基因、基因编辑和开发等方面。例如,通过原位杂交技术可以定位和特定基因,为基因和基因编辑提供基础数据和工具。
一. 原位杂交天
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的pbst溶液,放置5分钟。
2) 置换成30%的pbst溶液,gish,放置5分钟
3) 置换成pbst溶液,放置5分钟,重复一次
4) 置换成4%---的pbs溶液固定20分钟
5) 用pbst洗两次,每次放置五分钟,室温。
蛋白酶处理与后固定(本实验不做此步)
1) 用10ul/ml的蛋白酶k在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理,5体节到24小时的胚胎处理3分钟,24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。
2) 用pbst溶液轻洗,在pbst中放置5分钟。
3) 用4%---的pbs溶液固定20分钟,室温。
4) 用pbst洗两次,每次放置五分钟,室温。
在ishh,整个实验周期是比较长的,实验程序也比较繁杂,而杂交在ishh整个实验中可被认为是“短兵相接”的一步。杂交前的一切准备工作如增加组织通透性都是为了在杂交这一步骤中---探针能进入细胞或组织与其内的靶核苷酸相结合。因此,杂交是ishh中关键的而且是重要的一个环节。杂交是将杂交液滴于切片组织上,加盖硅化的盖玻片,防止孵育过程中的高温(50℃左右)导致杂交液的蒸发。为---杂交所需的湿润环境,可将其放在盛有少量5×ssc或2×ssc(standard saline citrate, ssc)溶液的硬塑料盒中进行孵育。杂交液的成分和预杂交液基本相同,所不同的是加入了标记的---探针和---葡聚糖。

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