武汉贝科新肽-gish

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    2023-11-28

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原位杂交技术的原理是什么?有何用途

  原位杂交技术的原理是利用---分子单链之间有互补的碱基序列,将有性或非性的外源---(即探针)与组织、细胞或染色体上待测dna或rna互补配对,结合成专一的---杂交分子,经一定的检测手段将待测---在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的---序列要具备3个重要条件:组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物(曾呈奎等2000)。





荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,fish)技术是在已有的性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性dna分子原位杂交技术。它利用荧光标记的---片段为探针,与染色体上或dna显微切片上的特异fl-n:~行杂交,gish,通过荧光检测系统(荧光显微镜)检测信号dna序列在染色体或dna显微切片上的目的dna序列,进而确定其杂交位点。fish技术检测时间短,检测灵敏度高,无污染,已广泛应用于染色体的鉴定、基因定位和异常染色体检测等领域。



将32 p标记的双链dna探针于100℃加热5分钟,迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间,盛滤膜的容器应盖严,以防液体蒸发。

杂交结束后,去除杂交液,立即于室温把滤膜放入大体积(300-500ml)的2×ssc和0.1% sds溶液中,轻轻振摇5分钟,并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次,同时应避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×ssc和0.1% sds溶液洗膜两次,每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景---或实验要求严格的洗膜条件,可用300-500ml 0.2×ssc和0.1% sds的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。



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