原位杂交技术服务-原位杂交-贝科新肽

以菌落原位杂交为例：对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。

将少数菌落转移到纤维素滤膜上

（1） 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

（2） 用无菌---将各个菌落先转移至滤膜上，再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种（或打点）。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后，在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

（3） 倒置平板，于37℃培养至划线的---菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

（4） 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，原位杂交，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

（5） 用parafilm膜封好主平板，植物原位杂交，倒置贮放于4℃，直至获得杂交反应的结果。

（6） 裂解---，荧光原位杂交，按本段下面所述方法，使释放的dna结合于纤维素滤膜。

原位杂交是一种生物学技术，它可以在细胞或组织中特定部位检测dna或rna的存在，而不需要将dna或rna分离出来。这项技术使用标记的dna或rna探针，与细胞或组织中的相应dna或rna进行特---结合，然后通过光学显微镜或电子显微镜观察探针的位置和数量。

原位杂交的原理很简单。dna或rna分子具有互补的核苷酸序列，因此可以通过氢键相互结合。将标记的dna或rna探针与细胞中的dna或rna进行杂交，可以特---地检测这些探针的位置和数量。探针的数量和位置可以反映dna或rna在细胞中的水平和分布。

根据---探针标记物的种类分别进行自显影或利用酶检测系统进行不同显色处理。细胞或组织的原位杂交切片在显示后均可进行半定量的测定，如自显影可利用人工或计算机辅助的图象分析检测仪（computer-assisted image ---ysis）检测银粒的数量和分布的差异。非性---探针杂交的细胞或组织可利用酶检测系统显色，然后利用显微分光光度计或图像分析仪对不同类型和数量的---的显色强度进行检测。




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