原位杂交-武汉贝科新肽科技公司-gish

将32 p标记的双链dna探针于100℃加热5分钟，迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间，植物组织原位杂交，盛滤膜的容器应盖严，以防液体蒸发。

杂交结束后，去除杂交液，原位杂交试剂，立即于室温把滤膜放入大体积（300-500ml）的2×ssc和0.1% sds溶液中，轻轻振摇5分钟，gish，并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次，同时应避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×ssc和0.1% sds溶液洗膜两次，每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景---或实验要求严格的洗膜条件，可用300-500ml 0.2×ssc和0.1% sds的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。

dna 探针为原位杂交提供较高的灵敏度。与rna探针相比，dna探针与靶mrna 分子的杂交强度较弱，因此在杂交后的洗涤中不应使用甲醛。

探针特------。如果已知细胞中mrna或dna的确切核苷酸序列，则可据此设计高度的互补探针。如果超过 5% 的碱基对不互补，那么探针只能与靶序列发生轻度杂交。这意味着，原位杂交，探针更容易在洗涤和检测步骤中被洗去，可能无---确检测。

基因组原位杂交技术基因组原位杂交(genome in situ hybridization，gish)技术是20世纪80年代末发展起来的一种原位杂交技术。它主要是利用物种之间dna同源性的差异，用另一物种的基因组dna以适当的浓度作封阻，在靶染色体上进行原位杂交。gish技术初应用于动物方面的研究(pinkel et al.，1986)，在植物上早应用于小麦和栽培种的鉴定(余舜武等 2001；王文奎等 2000)。




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