






fish是原位杂交技术大家族中的一员,因其所用探针被荧光物质标记(间接或直接)而得名,该方法在80年代末 被发明,现已从实验室逐步进入---诊断领域。基本原理是荧光标记的---探针在变性后与已变性的靶---在退火 温度下复性;通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象(即维持其原位)的前提下对靶---进行分析。dna荧光标记探针是其中常用的一类---探针。利用此探针可对组织、细胞或染色体中的dna进行染色体及基因水平 的分析。荧光标记探针不对环境构成污染,灵敏度能得到保障,可进行多色观察分析,因而可同时使用多个探针,缩 短因单个探针分开使用导致的周期过程和技术障碍。

原位杂交技术还在以下生物领域有应用:
生态学和环境科学:在生态学和环境科学领域,原位杂交技术可以用于研究生物与环境之间的相互作用。例如,通过标记特定基因的探针,可以检测环境中微生物种群的分布和变化,进而研究其对环境的影响和作用。
进化生物学:在进化生物学领域,原位杂交技术可以用于研究物种之间的遗传差异和进化关系。例如,通过比较不同物种之间基因序列的差异,gish,可以揭示物种之间的亲缘关系和进化历程。
一. 原位杂交天
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的pbst溶液,放置5分钟。
2) 置换成30%的pbst溶液,放置5分钟
3) 置换成pbst溶液,放置5分钟,重复一次
4) 置换成4%---的pbs溶液固定20分钟
5) 用pbst洗两次,每次放置五分钟,室温。
蛋白酶处理与后固定(本实验不做此步)
1) 用10ul/ml的蛋白酶k在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理,5体节到24小时的胚胎处理3分钟,24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。
2) 用pbst溶液轻洗,在pbst中放置5分钟。
3) 用4%---的pbs溶液固定20分钟,室温。
4) 用pbst洗两次,每次放置五分钟,室温。
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