原位杂交技术咨询-湖北原位杂交-武汉贝科新肽科技公司

以菌落原位杂交为例：对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。

将少数菌落转移到纤维素滤膜上

（1） 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

（2） 用无菌---将各个菌落先转移至滤膜上，再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种（或打点）。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后，在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

（3） 倒置平板，于37℃培养至划线的---菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

（4） 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

（5） 用parafilm膜封好主平板，原位杂交技术咨询，倒置贮放于4℃，直至获得杂交反应的结果。

（6） 裂解---，湖北原位杂交，按本段下面所述方法，使释放的dna结合于纤维素滤膜。

根据---探针标记物的种类分别进行自显影或利用酶检测系统进行不同显色处理。细胞或组织的原位杂交切片在显示后均可进行半定量的测定，如自显影可利用人工或计算机辅助的图象分析检测仪（computer-assisted image ---ysis）检测银粒的数量和分布的差异。非性---探针杂交的细胞或组织可利用酶检测系统显色，原位杂交技术，然后利用显微分光光度计或图像分析仪对不同类型和数量的---的显色强度进行检测。

生物领域应用原位杂交技术的例子：

基因表达和调控研究：原位杂交技术可以用于研究基因表达的调控机制。例如，原位杂交技术服务，可以标记特定基因的探针，检测该基因在不同环境、不同生长条件下的表达情况，进而研究其表达调控机制。

---与发育研究：在---与发育研究中，原位杂交技术常被用于检测和定位特定基因的表达情况，进而了解---的过程和机制。例如，可以标记与---相关的基因探针，检测该基因在不同组织、不同发育阶段的表达情况。

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