






gfp是绿色荧光蛋白,在扫描共---显微镜的激光照射下会发出绿色荧光,从而可以地定位蛋白质的位置。绿色萤光蛋白(gfp)是一个由约238个---酸组成的蛋白质,从蓝光到紫外线都能使其激发,蛋白互作,发出绿色荧光。通过基因工程技术,绿色萤光蛋白(gfp)基因能转进不同物种的基因组,在后代中持续表达,并且能根据启动子特---地表达。
使用gfp必须构建融合蛋白载体,并在转染之后有效表达。这样,若在荧光显微镜下看到细胞内某一部位存在gfp信号,说明和gfp融合的蛋白也存在于该部位,这样就达到了确定某物质亚细胞定位的目的。
为什么要提供gfp空载的对照图片?
(1)作为整个实验过程中的操作参照,可排除因实验操作而导致目的基因没有荧光信号的影响。
(2)作为载体体系的参照,确认构建载体时所使用的载体是可正常表达荧光蛋白的。
拍摄时为什么有明场通道?
(1)显示细胞状态,有活力的细胞应该有正确且明显的细胞形态,变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。
(2)显示荧光确实是细胞内蛋白表达的,而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。

内质网
内质网是细胞中的一个复杂网络,它负责合成和转运蛋白质。为了定位内质网,我们可以使用一种名为gfp-hdel的蛋白质来标记它们。gfp-hdel是一种带有绿色荧光的蛋白质,它可以与内质网上的hdel序列结合。在洋葱细胞中,内质网通常位于细胞的中央或周围。
高尔基体
高尔基体是细胞中的另一个复杂网络,它负责合成和转运蛋白质。为了定位高尔基体,我们可以使用一种名为fm4-64的化合物来标记它们。fm4-64可以穿过细胞膜并进入高尔基体,从而发出红色荧光。在洋葱细胞中高尔基体通常位于细胞的中央或周围。
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