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预杂交

1）每个管中置换成大约300ulhyb－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。

2）用等体积的hyb＋取代hyb－。

3）60℃水浴，预杂交4小时以上。

杂交

1）吸去预杂交的hyb＋，加上100ul已加入探针的hyb＋溶液（探针浓度约为1ng/ul）..

2）60℃ 温浴过夜。

 注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。

基因组原位杂交技术基因组原位杂交(genome in situ hybridization，gish)技术是20世纪80年代末发展起来的一种原位杂交技术。它主要是利用物种之间dna同源性的差异，gish，用另一物种的基因组dna以适当的浓度作封阻，在靶染色体上进行原位杂交。gish技术初应用于动物方面的研究(pinkel et al.，1986)，在植物上早应用于小麦和栽培种的鉴定(余舜武等 2001；王文奎等 2000)。




原位杂交技术(in situ hybridization，ish)是分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术，始于20世纪60年代。1969年美国耶鲁大学的gall等(1969)首先用爪蟾核糖体基因探针与其卵母细胞杂交，将该基因进行定位，与此同时buongiorno—nardelli和amaldi等(1970)相继利用同位素标记---探针进行了细胞或组织的基因定位，从而创造了原位杂交技术。自此以后，由于分子生物学技术的迅猛发展，---是20世纪70年代末到80年代初，分子、质粒和噬菌体dna的构建成功，为原位杂交技术的发展奠定了深厚的技术基础。




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