原位杂交-武汉贝科新肽科技公司-原位杂交检测

将32 p标记的双链dna探针于100℃加热5分钟，迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间，盛滤膜的容器应盖严，以防液体蒸发。

杂交结束后，原位杂交检测，去除杂交液，植物原位杂交，立即于室温把滤膜放入大体积（300-500ml）的2×ssc和0.1% sds溶液中，轻轻振摇5分钟，并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次，同时应避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×ssc和0.1% sds溶液洗膜两次，每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景---或实验要求严格的洗膜条件，可用300-500ml 0.2×ssc和0.1% sds的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。

这一原理对于检测一个特异的mrna在某一种生物体，原位杂交，或者某些组织切片、单个细胞里具体表达位置非常有用。该技术早应用于60年代末期，由于---分子杂交的特---高，并可定位，因此该技术已被广泛应用，例如与细胞内rna进行杂交以观察该组织细胞中特定基因表达水平。原位杂交能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其他成分的影响，因此对于那些细胞数量少且散在于其他组织中的细胞内dna或rna研究更为方便；同时由于原位杂交不需要从组织中提取---，对于组织中含量极低的靶序列有---的敏感性，并可完整地保持组织与细胞的形态，原位杂交技术，更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。

植物组织原位杂交技术在植物基因表达和调控研究中具有广泛的应用。它可以用来研究植物发育、生长、逆境响应等方面的基因表达模式和调控机制。例如，可以利用该技术研究植物中的转录因子、信号转导通路、代谢途径等基因的表达和调控。此外，植物组织原位杂交技术还可以用来鉴定植物中的病原体、检测植物等方面。

总之植物组织原位杂交技术是一种重要的分子生物学技术，可以用来研究植物基因的表达和调控。它具有操作简便、结果---、应用广泛等优点，是植物分子生物学研究中不可或缺的工具。

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