湖北原位杂交-武汉贝科新肽公司-原位杂交技术

菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜

（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。

（2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤（1）。

（3） 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。

（4） 吸干滤膜，原位杂交技术，把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，荧光原位杂交，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。

（5） 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，湖北原位杂交，固定dna。

（6） 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。

原位杂交技术的原理是什么？有何用途

　　原位杂交技术的原理是利用---分子单链之间有互补的碱基序列，将有性或非性的外源---(即探针)与组织、细胞或染色体上待测dna或rna互补配对，结合成专一的---杂交分子，经一定的检测手段将待测---在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的---序列要具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物(曾呈奎等2000)。