原位杂交是一种---的技术，它使研究人员能够在细胞或组织中确定特定dna或rna序列的位置。这项技术在基础研究和---应用中都有广泛的应用。通过了解原位杂交的基本原理和实验步骤，研究人员可以---地理解其功能并应用于他们的研究中。
原位杂交技术的定义和基本原理原位杂交技术是一种基于---分子杂交原理，将标记的---探针与生物组织或细胞中的dna或rna进行特---结合，从而在细胞水平上检测目标---序列分布的技术。原位杂交技术的基本原理是利用dna或rna的互补性，通过加热或化学反应使探针与组织或细胞中的目标---序列形成双链复合物，进而实现目标---序列的定位。
以菌落原位杂交为例：对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。经培养一段时间后，gish，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。
将少数菌落转移到纤维素滤膜上
（1） 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。
（2） 用无菌---将各个菌落先转移至滤膜上，再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种（或打点）。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后，在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。
（3） 倒置平板，于37℃培养至划线的---菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。
（4） 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。
（5） 用parafilm膜封好主平板，倒置贮放于4℃，直至获得杂交反应的结果。
（6） 裂解---，按本段下面所述方法，使释放的dna结合于纤维素滤膜。
在ishh，整个实验周期是比较长的，实验程序也比较繁杂，而杂交在ishh整个实验中可被认为是“短兵相接”的一步。杂交前的一切准备工作如增加组织通透性都是为了在杂交这一步骤中---探针能进入细胞或组织与其内的靶核苷酸相结合。因此，杂交是ishh中关键的而且是重要的一个环节。杂交是将杂交液滴于切片组织上，加盖硅化的盖玻片，防止孵育过程中的高温（50℃左右）导致杂交液的蒸发。为---杂交所需的湿润环境，可将其放在盛有少量5×ssc或2×ssc（standard saline citrate， ssc）溶液的硬塑料盒中进行孵育。杂交液的成分和预杂交液基本相同，所不同的是加入了标记的---探针和---葡聚糖。
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