






fish是原位杂交技术大家族中的一员,因其所用探针被荧光物质标记(间接或直接)而得名,该方法在80年代末 被发明,现已从实验室逐步进入---诊断领域。基本原理是荧光标记的---探针在变性后与已变性的靶---在退火 温度下复性;通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象(即维持其原位)的前提下对靶---进行分析。dna荧光标记探针是其中常用的一类---探针。利用此探针可对组织、细胞或染色体中的dna进行染色体及基因水平 的分析。荧光标记探针不对环境构成污染,灵敏度能得到保障,可进行多色观察分析,gish,因而可同时使用多个探针,缩 短因单个探针分开使用导致的周期过程和技术障碍。

细胞特---mrna转录的定位,可用于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究;组织中---dna/rna的检测和定位,如eb---mrna、人类状瘤---和巨细胞---dna的检测;癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测;基因在染色体上的定位;检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等;分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定,某些的诊断和生物学剂量测定等。

以菌落原位杂交为例:对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落(100-200)进行筛选时,可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。经培养一段时间后,对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。
将少数菌落转移到纤维素滤膜上
(1) 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。
(2) 用无菌---将各个菌落先转移至滤膜上,再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种(或打点)。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后,在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。
(3) 倒置平板,于37℃培养至划线的---菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。
(4) 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂,在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。
(5) 用parafilm膜封好主平板,倒置贮放于4℃,直至获得杂交反应的结果。
(6) 裂解---,按本段下面所述方法,使释放的dna结合于纤维素滤膜。

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