贝科新肽科技公司-动物组织原位杂交-原位杂交

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    2024-1-13

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原位杂交技术(in situhybridization)是以标记的---分子为探针,动物组织原位杂交,在组织细胞原位检测特异---分子的技术。使含有特异序列、经过标记的---单链即探针,在适宜条件下与组织细胞中的互补---单链即靶---发生杂交,荧光原位杂交,再以自显影或细胞化学方法对标记探针进行探测,从而在细胞原位显示特异的dna或rna分子。

可以检测crna、mirna、lnrna、dna。可以各种种属的标本,包括哺乳动物、爬行动物、菌、植物标本。也可以检测组织芯片。




原位杂交技术方法大致可分为:1.杂交前准备,原位杂交,包括固定、取材、玻片和组织的处理,如何增强---探针的穿透性、减低背景染色等;2.杂交;3.杂交后处理;4.显示(visualization):包括性自显影和非性标记的显色。固定原位杂交组织化学技术在固定剂的应用和选择上应---到三个方面:保持细胞结构,限度地保持细胞内dna或rna的水平;使探针易于进入细胞或组织。dna是比较稳定的,mrna是相对稳定的但易为酶合成和降解。rna却绝然不同,非常容易被降解。因此,对于dna的定位来说,固定剂的种类和浓度并不十分重要。相反,在rna的定位上,如果要使rna的降解减少到低限度,那么,不仅固定剂的种类浓度和固定的时间十分重要,而且取材后应尽快予以冷冻或固定。




 组织原位杂交(tissue in situ hybridization),即原位杂交组织化学技术和原位杂交细胞化学技术

  原位杂交技术的基本原理

  利用---分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。

  1.两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,通过氢键结合,形成dna-dna、dna一rna或rna一rna双键分子

  2.应用带有标记的(有性同位素,如3h、35s、32p,荧光素、生物素、等非性物质)dna或rn---段作为---探针,与组织切片或细胞内待测---(rna或dna)片段进行杂交

  3.用自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的mrna或dna的存在与定位

  用原位杂交术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。

  此方法有---的敏感性和特---,可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。




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