植物原位杂交-武汉贝科新肽公司-原位杂交

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    2024-1-14

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原位杂交(in situ hybridazation)

固定

收集斑马鱼的胚胎,在holfretor水中培养,到达所需要的发育时期时,用蛋白酶去除卵膜,原位杂交,用4%---固定,在4℃保存,二十四小时后用50%2%---溶液洗,然后换成,在-20c 保存,待用(两天和两天以上的胚胎需要用处理,去除色素。或者使用---锍脲稀溶液培养,可阻断色素的形成)






dna 探针为原位杂交提供较高的灵敏度。与rna探针相比,dna探针与靶mrna 分子的杂交强度较弱,原位杂交技术服务,因此在杂交后的洗涤中不应使用甲醛。

探针特------。如果已知细胞中mrna或dna的确切核苷酸序列,则可据此设计高度的互补探针。如果超过 5% 的碱基对不互补,原位杂交技术,那么探针只能与靶序列发生轻度杂交。这意味着,探针更容易在洗涤和检测步骤中被洗去,可能无---确检测。





原位杂交第二天

1.

1)将探针回收,放于-20c保存(通常探针可重复使用十次左右)。

2)加入50%---胺/2xssct溶液1毫升,60℃,放置30分钟,重复一次。

3)置换2xssct1ml,60℃,放置15分钟。

4)置换0.2xssct1ml,60℃,放置30分钟,重复一次。

2.

1)用mabt洗两次,植物原位杂交,每次五分钟,放在摇床轻轻摇动。

2)室温下加1ml 1:2:7溶液,时间为一小时。

3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶连,4c 冰箱过夜。






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