湖北bifc-贝科新肽(商家)

亚细胞定位操作步骤

1、通过一些在线网站预测亚细胞定位

2、亚细胞定位载体构建

（1）引物设计：利用引物设计软件，根据pegp-mcs-n1或pegp-c1-mcs的酶切位点设计目的基因引物。

（2）载体构建：将pcr产物酶切后插入pegp-mcs-n1或pef-c1-mcs，得到表达目的基因与egp融合蛋白质的真核表达载体。

3、细胞转染

当细胞生长到对数生长期时，接种到共---显微镜的玻璃底培养皿（35mm petri dish，10 mm microwell）中，培养过夜。当细胞贴壁率达到30%~50%时，将融合绿色荧光蛋白gfp的重组载体质粒和目标细胞器质粒共转染细胞。37℃孵箱培养24~72h。

4、激光扫描共---显微镜观察

将上述细胞分别在24、36、48、72h的时间点，根据实验需求选择对应激发波长（常用405nm、488nm和561nm），bifc，使用共---显微镜观察，采取图像。

亚细胞定位服务是生命科学研究中不可或缺的一部分，它能够揭示蛋白质和其他细胞成分在细胞内的具---置和作用。随着生物技术的不断进步和完善，亚细胞定位服务将会和，为生命科学研究提供---大的支持。未来，我们期待着亚细胞定位技术在---诊断、研发等方面发挥的作用，为人类健康事业的发展做出的贡献。亚细胞定位，亚细胞定位，亚细胞定位

为什么要提供gfp空载的对照图片？

（1）作为整个实验过程中的操作参照，可排除因实验操作而导致目的基因没有荧光信号的影响。

（2）作为载体体系的参照，确认构建载体时所使用的载体是可正常表达荧光蛋白的。

拍摄时为什么有明场通道？

（1）显示细胞状态，有活力的细胞应该有正确且明显的细胞形态，变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。

（2）显示荧光确实是细胞内蛋白表达的，而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。

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