






原位杂交技术可以应用于以下场景:
组织中---dna/rna的检测和定位。例如,可以用于检测eb---mrna、人类状瘤---和巨细胞---dna等。
癌基因、抑癌基因及其他各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。
检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等。
在植物基因组研究中的应用。例如,通过与特定基因序列的探针进行杂交,可以在植物染色体上定位到目标基因的位置,进而构建遗传图谱,为植物育种和基因组研究提供基础数据。
杂交 (1) 盛有2×ssc的塑料盘同,将干烤的滤膜飘浮在液面上,浸湿5分钟。(2) 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起,放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿,湖北原位杂交,放---于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中,应缓缓摇动滤膜,防止它们粘在一起。(3) 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去---碎片,以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。(4) 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中,在适宜温度(即在水溶液中杂交时用68℃,原位杂交技术服务,而在50%---胺中杂交时用42℃)下,预杂交1-2小时。

一. 原位杂交天
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,荧光原位杂交技术,加入50%的pbst溶液,放置5分钟。
2) 置换成30%的pbst溶液,放置5分钟
3) 置换成pbst溶液,原位杂交公司,放置5分钟,重复一次
4) 置换成4%---的pbs溶液固定20分钟
5) 用pbst洗两次,每次放置五分钟,室温。
蛋白酶处理与后固定(本实验不做此步)
1) 用10ul/ml的蛋白酶k在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理,5体节到24小时的胚胎处理3分钟,24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。
2) 用pbst溶液轻洗,在pbst中放置5分钟。
3) 用4%---的pbs溶液固定20分钟,室温。
4) 用pbst洗两次,每次放置五分钟,室温。
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