原位杂交技术-湖北原位杂交-武汉贝科新肽科技公司

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    2024-1-22

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菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜

(1) 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼(0.75ml),原位杂交检测,使菌落面朝上,将滤膜放到小洼上,展平保鲜膜,使滤膜均匀湿润,让滤膜留于原处2-3分钟。

(2) 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜,用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤(1)。

(3) 吸干滤膜,原位杂交技术咨询,将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4)的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜,再重复一次该步骤。

(4) 吸干滤膜,把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4)的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜,转移到一张干的滤纸上,置于室温20-30分钟,使滤膜干燥。

(5) 将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,湖北原位杂交,固定dna。

(6) 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。




原位杂交技术可以应用于以下场景:

组织中---dna/rna的检测和定位。例如,可以用于检测eb---mrna、人类状瘤---和巨细胞---dna等。

癌基因、抑癌基因及其他各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。

检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等。

在植物基因组研究中的应用。例如,通过与特定基因序列的探针进行杂交,可以在植物染色体上定位到目标基因的位置,进而构建遗传图谱,为植物育种和基因组研究提供基础数据。




原位杂交:

  原位杂交是指用特定探针定位、检测dna、rna的一种有效的实验方法,通过把特点序列客隆到特殊载体上,通过转录酶反转一条天然的rna探针,原位杂交技术,将探针和切片样品进行杂交,通过一系列显色方法,来确定rna或者dna表达区域;本中心原位杂交探针采用的是第高辛和生物素标记,灵敏度和同位素相当。 我们采用roche标记及显色试剂盒,gish/ish/fish按照探针进行收费,每个试剂盒每条探针可以杂交60-80张玻片,收费为1万5千元,gish杂交因需要加抗淬灭剂每条探针收费为1万9千元。量---!






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