






荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,fish)是在20世纪80年代末在性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子(reporter molecule)结合,杂交后再通过细胞化学过程连接上荧光染料.fish的基本原理是将dna(或rna)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或dna纤维切片上,再用与荧光素分子偶联的单与探针分子特---结合来检测dna序列在染色体或dna纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.fish具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点,不但能显示中期分裂相,还能显示于间期核.同时在荧光原位杂交基础上又发展了多彩色荧光原位杂交技术和染色质纤维荧光原位杂交技术.

原位杂交(in situ hybridization)是指将特定标记的已知---序列为探针与细胞或组织切片中---进行杂交,荧光原位杂交技术,从而对特定---序列进行定量定位的过程。这个技术可以用于研究细胞或组织中特定基因或dna序列的表达和定位,从而帮助研究者深入理解和探究生物学过程。原位杂交有几种不同的类型,包括荧光原位杂交和其他用于基因表达分析的方法。

原位杂交第三天
1) 用1ml含10%热灭清的mabt溶液置换溶液,放置摇床上25分钟,原位杂交技术,然后用1mlmabt置换,25分钟,再用1mlmabt溶液置换,一小时以上,荧光原位杂交,后用1mlmabt溶液置换,25分钟。
2) 用1ml 1mm左旋米睉的staining buffer洗三次,每次放置五分钟。
3)将胚胎转入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul bm purple ap substrate(底物,用之前加5mm左旋米唑),原位杂交,十六孔板外面包上锡箔纸以避光,避免摇动,室温下显色。
4)每隔一小时观察胚胎是否开始显色
5)将显色完全的胚胎中的底物吸出,用pbst洗两三次后加上4%---固定,拍照。
6)4c冰箱保存。
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