






一. 原位杂交天
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的pbst溶液,放置5分钟。
2) 置换成30%的pbst溶液,放置5分钟
3) 置换成pbst溶液,放置5分钟,重复一次
4) 置换成4%---的pbs溶液固定20分钟
5) 用pbst洗两次,每次放置五分钟,室温。
蛋白酶处理与后固定(本实验不做此步)
1) 用10ul/ml的蛋白酶k在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理,5体节到24小时的胚胎处理3分钟,24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。
2) 用pbst溶液轻洗,gish,在pbst中放置5分钟。
3) 用4%---的pbs溶液固定20分钟,室温。
4) 用pbst洗两次,每次放置五分钟,室温。
原位杂交技术还在以下生物领域有应用:
细胞化学和学:原位杂交技术可以用于研究细胞内特定化学物质的定位和分布,例如检测细胞内酶、、神经递质等物质的分布和定位。此外,还可以应用于学研究,例如检测细胞、分子的分布和定位等。
神经科学:在神经科学领域,原位杂交技术常被用于研究神经元的生长、发育和连接等过程。例如,通过标记特定基因的探针,可以检测神经元中特定基因的表达和定位,进而研究其在神经信号传递、神经环路形成等方面的作用。
---原位杂交可根据其检测物而分为细胞内原位杂交和组织切片内原位杂交;根据其所用探针及所要检测---的不同又可分为dna-dna, rna-dna, rna-rna杂交。但不论哪种杂交都必须经过组织细胞的固定,预杂交,杂交,冲等一系列洗步骤及自显影或酶法显色以显示杂交结果。
我们在这儿介绍的是整胚原位杂交,不同于一般的在载片上对细胞和组织切片进行探针杂交及检测的原位杂交,
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