贝科新肽科技公司-gish-原位杂交

将32 p标记的双链dna探针于100℃加热5分钟，迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间，盛滤膜的容器应盖严，以防液体蒸发。

杂交结束后，去除杂交液，原位杂交检测，立即于室温把滤膜放入大体积（300-500ml）的2×ssc和0.1% sds溶液中，轻轻振摇5分钟，并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次，同时应避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×ssc和0.1% sds溶液洗膜两次，gish，每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景---或实验要求严格的洗膜条件，可用300-500ml 0.2×ssc和0.1% sds的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。

预杂交

1）每个管中置换成大约300ulhyb－溶液，原位杂交，60℃水浴5分钟，避免振荡。

2）用等体积的hyb＋取代hyb－。

3）60℃水浴，预杂交4小时以上。

杂交

1）吸去预杂交的hyb＋，植物染色体原位杂交，加上100ul已加入探针的hyb＋溶液（探针浓度约为1ng/ul）..

2）60℃ 温浴过夜。

 注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。