武汉贝科新肽-蛋白互作

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    2024-2-28

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原理简介

gfp、rfp等荧光蛋白因其的荧光性质和灵敏性,常作为报告基因研究并分析基因产物在细胞中的定位和相互作用等。将目标蛋白与荧光蛋白的n端或者c端融合,通过瞬时转化技术或稳定遗传转化技术,使得该融合蛋白在受体材料细胞内表达,目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器,通过显微镜观察荧光蛋白在细胞内显示的位置,确定目标蛋白的位置,从而确定目标蛋白的亚细胞定位情况。







bifc技术具有许多优点,例如高灵敏度、高特---和高分辨率。它不仅可以用于研究细胞内蛋白质-蛋白质相互作用,还可以用于研究蛋白质-dna相互作用和蛋白质-脂质相互作用。此外,蛋白互作,bifc技术还可以用于筛选和---,因为它可以快速检测出对蛋白质-蛋白质相互作用的影响。

然而,bifc技术也存在一些局限性。例如,荧光蛋白可能会对细胞产生毒性作用,而且荧光信号的检测可能需要昂贵的仪器设备。此外,荧光蛋白的荧光信号可能会受到细胞内其他物质的干扰,从而影响结果的准确性。







基因法转化洋葱表皮细胞:

分别用70%---和灭菌蒸馏水清洗金粉(直径为1 μm),加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液,取100 μl 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中,边振荡边加入10 μl pcambia2301-gamyb2-gfp质粒,逐步加入40 μl 0.1 mol·l-1 亚精胺和100 μl2.5 mol·l-1 cacl2,振荡混匀。基因gds-80轰击时---气罐的气压为1 300 psi,取10 μl dna 包裹好的微粒悬浮液加到基因中央,进行轰击,之后放置25℃避光过夜培养,使用confocallaser激光共---显微镜观察。




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