






双分子荧光互补技术是一种在生物学领域中广泛应用的实验技术。该技术利用荧光标记的两个分子,通过荧光共振能量转移(fret)原理,检测两个分子之间的相互作用。下面将详细介绍双分子荧光互补技术的原理、实验步骤、应用和发展趋势。
双分子荧光互补技术的原理
双分子荧光互补技术是基于荧光共振能量转移(fret)原理的。当两个荧光基团在一个紧密的空间内相互靠近时,一个荧光基团发射的荧光能量会被另一个基团吸收,双分子荧光互补技术,导致第二个基团也发射荧光。这种荧光能量转移现象称为荧光共振能量转移。通过检测两个荧光基团之间的能量转移效率,可以推断出两个分子之间的距离和相互作用情况。
直接法
将标记的特---荧光,直接加在抗原标本上,经一定的温度和时间的染色,用水洗去未参加反应的多余荧光,室温下干燥后封片、镜检。
间接法
如检查未知抗原,先用已知未标记的特异()与抗原标本进行反应,用水洗去未反应的,再用标记的抗(第二)与抗原标本反应,使之形成—抗原—复合物,再用水洗去未反应的标记,干燥、封片后镜检。如果检查未知,则表明抗原标本是已知的,待检为,其它步骤的抗原检查相同。

为什么不先对一个基因做预测,在预测的结果上直接做共定位?
不同的预测网站有不同的计算方法,同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的,对于不清楚可能定位在哪里的基因,一般先做普通定位,根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。
为什么有的基因做原生质体转化时荧光蛋白不亮?
不同物种的细胞可能对基因表达有影响,当在一种材料的原生质体中观察不到荧光时,可以考虑换一种受体材料。另外,如果是分泌蛋白,在原生质体中无法观察到荧光,此时可以考虑注射叶片来观察荧光。
拍摄时为什么有明场通道?
(1)显示细胞状态,有活力的原生质体细胞应该是饱满圆润的,变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。
(2)显示荧光确实是细胞内蛋白表达的,而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。
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