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　组织原位杂交(tissue in situ hybridization），即原位杂交组织化学技术和原位杂交细胞化学技术

　　原位杂交技术的基本原理

　　利用---分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，gish，形成杂交的双链。

　　1.两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，通过氢键结合，形成dna-dna、dna一rna或rna一rna双键分子

　　2.应用带有标记的（有性同位素，如3h、35s、32p，荧光素、生物素、等非性物质)dna或rn---段作为---探针，与组织切片或细胞内待测---(rna或dna）片段进行杂交

　　3.用自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的mrna或dna的存在与定位

　　用原位杂交术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。

　　此方法有---的敏感性和特---，可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

在原位杂交过程中，需要使用标记的---探针，通常是在性核素或非性物质中标记的。这些探针可以通过不同的方式制备，例如从已知序列的dna或rna制备，或者通过使用生物信息学方法设计和合成新的探针。

在进行原位杂交时，细胞或组织需要固定在适当的支持物上，例如载玻片。然后，探针与细胞或组织中的dna或rna进行杂交，通常是在加热条件下进行的。接下来，通过洗涤和显影步骤去除未结合的探针和信号增强剂，后用显微镜观察杂交信号的位置。

杂交　（1） 盛有2×ssc的塑料盘同，将干烤的滤膜飘浮在液面上，浸湿5分钟。（2） 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起，放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿，放---于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中，应缓缓摇动滤膜，防止它们粘在一起。（3） 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去---碎片，以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。（4） 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中，在适宜温度（即在水溶液中杂交时用68℃，而在50%---胺中杂交时用42℃）下，预杂交1-2小时。





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