湖北gish-贝科新肽

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    2024-3-15

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菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜

(1) 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,将滤膜放到小洼上,展平保鲜膜,使滤膜均匀湿润,让滤膜留于原处2-3分钟。

(2) 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜,用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤(1)。

(3) 吸干滤膜,将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4)的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜,再重复一次该步骤。

(4) 吸干滤膜,把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4)的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜,转移到一张干的滤纸上,置于室温20-30分钟,使滤膜干燥。

(5) 将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,固定dna。

(6) 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。





原位杂交技术的原理是什么?有何用途

  原位杂交技术的原理是利用---分子单链之间有互补的碱基序列,将有性或非性的外源---(即探针)与组织、细胞或染色体上待测dna或rna互补配对,gish,结合成专一的---杂交分子,经一定的检测手段将待测---在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的---序列要具备3个重要条件:组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物(曾呈奎等2000)。







原位杂交技术的技术流程

原位杂交技术的技术流程包括样本处理、探针制备、杂交反应和信号检测等步骤。样本处理包括组织或细胞的固定、包埋、切片和脱氧核糖---酶---等步骤,目的是保持组织或细胞的原始结构和---序列的完整性。探针制备包括标记探针、纯化和变性等步骤,目的是提高探针的特---和敏感性。杂交反应包括预杂交、杂交和洗脱等步骤,目的是使探针与目标---序列形成双链复合物。信号检测包括显色反应、荧光染色和性同位素标记等步骤,目的是可视化目标---序列的分布。





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