






原位杂交是在分子生物学领域应用---广泛的实验技术之一,是在研究生物体发育过程中的一种---重要的分子遗传学的研究方法。其英文名为in situ hybridization,其中in situ为拉丁文,原义是in its natural ition. 字面的意思理解就是说在其原来的天然的位置处杂交。原位杂交主要是基于以下这个主要原理:单链的dna或者rna只要他们的序列是互补的,即符合at,cg的碱基配对原则,那么这样的两条---链之间(dna-dna,dna-rna,rna-rna)就可以形成一个稳定的杂交复合体。

将32 p标记的双链dna探针于100℃加热5分钟,迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间,gish,盛滤膜的容器应盖严,以防液体蒸发。
杂交结束后,去除杂交液,立即于室温把滤膜放入大体积(300-500ml)的2×ssc和0.1% sds溶液中,轻轻振摇5分钟,并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次,同时应避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×ssc和0.1% sds溶液洗膜两次,每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景---或实验要求严格的洗膜条件,可用300-500ml 0.2×ssc和0.1% sds的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。
原位杂交技术还在以下生物领域有应用:
细胞化学和学:原位杂交技术可以用于研究细胞内特定化学物质的定位和分布,例如检测细胞内酶、、神经递质等物质的分布和定位。此外,还可以应用于学研究,例如检测细胞、分子的分布和定位等。
神经科学:在神经科学领域,原位杂交技术常被用于研究神经元的生长、发育和连接等过程。例如,通过标记特定基因的探针,可以检测神经元中特定基因的表达和定位,进而研究其在神经信号传递、神经环路形成等方面的作用。
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