预杂交
1）每个管中置换成大约300ulhyb－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。
2）用等体积的hyb＋取代hyb－。
3）60℃水浴，预杂交4小时以上。
杂交
1）吸去预杂交的hyb＋，加上100ul已加入探针的hyb＋溶液（探针浓度约为1ng/ul）..
2）60℃ 温浴过夜。
注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，gish，探针结合越好，温度越高，背景越小。
多彩色荧光原位杂交技术多彩色荧光原位杂交(multicolor fluorescence in situ hybridization，mfish)是在荧光原位杂交技术的基础上发展起来的一种新技术，它用几种不同颜色的荧光素单独或混合标记的探针进行原位杂交，能同时检测多个靶位，各靶位在荧光显微镜下和照片上的颜色不同，呈现多种色彩，因而被称为多彩色荧光原位杂交。它克服了fish技术的局限，能同时检测多个基因，在检测遗传物质的突变和染色体上基因定位等方面得到了广泛的应用
原位杂交技术的技术流程
原位杂交技术的技术流程包括样本处理、探针制备、杂交反应和信号检测等步骤。样本处理包括组织或细胞的固定、包埋、切片和脱氧核糖---酶---等步骤，目的是保持组织或细胞的原始结构和---序列的完整性。探针制备包括标记探针、纯化和变性等步骤，目的是提高探针的特---和敏感性。杂交反应包括预杂交、杂交和洗脱等步骤，目的是使探针与目标---序列形成双链复合物。信号检测包括显色反应、荧光染色和性同位素标记等步骤，目的是可视化目标---序列的分布。
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