原位杂交第二天
1.
1）将探针回收，放于－20c保存(通常探针可重复使用十次左右)。
2）加入50%---胺/2xssct溶液1毫升，60℃，gish，放置30分钟，重复一次。
3）置换2xssct1ml，60℃，放置15分钟。
4）置换0.2xssct1ml，60℃，放置30分钟，重复一次。
2.
1）用mabt洗两次，每次五分钟，放在摇床轻轻摇动。
2）室温下加1ml 1：2：7溶液，时间为一小时。
3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶连，4c 冰箱过夜。
植物组织原位杂交是一种重要的分子生物学技术，它可以用来研究植物基因的表达和调控。该技术利用dna探针与目标组织中的rna或dna结合，从而确定目标基因的表达模式和位置。本文将介绍植物组织原位杂交的原理、步骤和应用。
原理
植物组织原位杂交的原理是利用dna探针与目标组织中的rna或dna结合，从而确定目标基因的表达模式和位置。dna探针是一段已知序列的dna分子，可以与目标rna或dna的互补序列结合。在组织原位杂交中，dna探针通常标记有荧光染料或性同位素，以便于检测。
杂交 （1） 盛有2×ssc的塑料盘同，将干烤的滤膜飘浮在液面上，浸湿5分钟。（2） 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起，放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿，放---于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中，应缓缓摇动滤膜，防止它们粘在一起。（3） 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去---碎片，以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。（4） 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中，在适宜温度（即在水溶液中杂交时用68℃，而在50%---胺中杂交时用42℃）下，预杂交1-2小时。
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