






原位杂交是一种生物学技术,它可以在细胞或组织中特定部位检测dna或rna的存在,而不需要将dna或rna分离出来。这项技术使用标记的dna或rna探针,与细胞或组织中的相应dna或rna进行特---结合,然后通过光学显微镜或电子显微镜观察探针的位置和数量。
原位杂交的原理很简单。dna或rna分子具有互补的核苷酸序列,因此可以通过氢键相互结合。将标记的dna或rna探针与细胞中的dna或rna进行杂交,可以特---地检测这些探针的位置和数量。探针的数量和位置可以反映dna或rna在细胞中的水平和分布。

---原位杂交可根据其检测物而分为细胞内原位杂交和组织切片内原位杂交;根据其所用探针及所要检测---的不同又可分为dna-dna, rna-dna, rna-rna杂交。但不论哪种杂交都必须经过组织细胞的固定,预杂交,杂交,gish,冲等一系列洗步骤及自显影或酶法显色以显示杂交结果。
我们在这儿介绍的是整胚原位杂交,不同于一般的在载片上对细胞和组织切片进行探针杂交及检测的原位杂交,
这一原理对于检测一个特异的mrna在某一种生物体,或者某些组织切片、单个细胞里具体表达位置非常有用。该技术早应用于60年代末期,由于---分子杂交的特---高,并可定位,因此该技术已被广泛应用,例如与细胞内rna进行杂交以观察该组织细胞中特定基因表达水平。原位杂交能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其他成分的影响,因此对于那些细胞数量少且散在于其他组织中的细胞内dna或rna研究更为方便;同时由于原位杂交不需要从组织中提取---,对于组织中含量极低的靶序列有---的敏感性,并可完整地保持组织与细胞的形态,更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。

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