双分子荧光互补-贝科新肽

洋葱亚细胞定位的方法包括但不限于以下三种：

荧光法：利用抗原与的特---结合，在细胞内产生荧光标记，从而确定细胞内抗原的分布位置。

gfp融合蛋白表达法：将目的蛋白与绿色荧光蛋白(gfp)融合，通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达位置。

亚细胞分离法：通过一定的物理或化学方法，将细胞进行破碎，双分子荧光互补，然后通过离心、密度梯度离心等方法将细胞器分离出来，再对分离出来的各个细胞器进行成分和结构分析。

原理简介

gfp、rfp等荧光蛋白因其的荧光性质和灵敏性，常作为报告基因研究并分析基因产物在细胞中的定位和相互作用等。将目标蛋白与荧光蛋白的n端或者c端融合，通过瞬时转化技术或稳定遗传转化技术，使得该融合蛋白在受体材料细胞内表达，目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器，通过显微镜观察荧光蛋白在细胞内显示的位置，确定目标蛋白的位置，从而确定目标蛋白的亚细胞定位情况。

gamyb2 在洋葱表皮细胞中的瞬时表达分析：采用基因轰击的方法，用包裹质粒的金粉对洋葱表皮进行轰击，暗培养过夜后，在激光共---显微镜下进行观察，从图a 中可以看出对照gfp空载体在整个洋葱细胞均能看到绿色荧光，为组成型表达；从图b 中发现gamyb2-gfp 的融合表达载体只能在细胞核中能看到绿色荧光，这进一步证明该蛋白不具有跨膜蛋白结构，定位在细胞核中，具有转录因子的一般特征。




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