同一样本可以多次做原位杂交实验吗?
一般情况下，如果操作没有得到理想的结果，是可以将探针洗涤然后进行再次的杂交的。如果使用的是直标型探针，还可以使用不同探针对同一样本进行反复杂交。针对不同的样本，处理方法略有不同。
原位杂交实操中哪些因素比较重要?
重要的因素：温度、光照、湿度和试剂的ph值。温度和湿度直接影响着探针和目标dna的杂交效率；光照影响着荧光染料的强度，所以探针要避光保存，其已经杂交的片子可用防荧光淬火剂封片且避光保存；各种试剂ph也要达到要求，这也直接关系到原位杂交的稳定性。
组织原位杂交(tissue in situ hybridization），即原位杂交组织化学技术和原位杂交细胞化学技术
原位杂交技术的基本原理
利用---分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，gish，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。
1.两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，通过氢键结合，形成dna-dna、dna一rna或rna一rna双键分子
2.应用带有标记的（有性同位素，如3h、35s、32p，荧光素、生物素、等非性物质)dna或rn---段作为---探针，与组织切片或细胞内待测---(rna或dna）片段进行杂交
3.用自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的mrna或dna的存在与定位
用原位杂交术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。
此方法有---的敏感性和特---，可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。
原位杂交技术方法大致可分为：1.杂交前准备，包括固定、取材、玻片和组织的处理，如何增强---探针的穿透性、减低背景染色等；2.杂交；3.杂交后处理；4.显示（visualization）：包括性自显影和非性标记的显色。固定原位杂交组织化学技术在固定剂的应用和选择上应---到三个方面：保持细胞结构，限度地保持细胞内dna或rna的水平；使探针易于进入细胞或组织。dna是比较稳定的，mrna是相对稳定的但易为酶合成和降解。rna却绝然不同，非常容易被降解。因此，对于dna的定位来说，固定剂的种类和浓度并不十分重要。相反，在rna的定位上，如果要使rna的降解减少到低限度，那么，不仅固定剂的种类浓度和固定的时间十分重要，而且取材后应尽快予以冷冻或固定。
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