原理简介
gfp、rfp等荧光蛋白因其的荧光性质和灵敏性，植物启动子筛选，常作为报告基因研究并分析基因产物在细胞中的定位和相互作用等。将目标蛋白与荧光蛋白的n端或者c端融合，通过瞬时转化技术或稳定遗传转化技术，使得该融合蛋白在受体材料细胞内表达，目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器，通过显微镜观察荧光蛋白在细胞内显示的位置，确定目标蛋白的位置，从而确定目标蛋白的亚细胞定位情况。
基因法转化洋葱表皮细胞：
分别用70%---和灭菌蒸馏水清洗金粉（直径为1 μm），加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液，取100 μl 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中，边振荡边加入10 μl pcambia2301-gamyb2-gfp质粒，逐步加入40 μl 0.1 mol·l-1 亚精胺和100 μl2.5 mol·l-1 cacl2，振荡混匀。基因gds-80轰击时---气罐的气压为1 300 psi，取10 μl dna 包裹好的微粒悬浮液加到基因中央，进行轰击，之后放置25℃避光过夜培养，使用confocallaser激光共---显微镜观察。
什么是亚细胞定位？首先我们来看什么是亚细胞。细胞是构成生物体的基本结构单位和功能单位，是生命的物质基础。细胞的结构复杂精巧且高度有序，亚细胞是比细胞结构更细化的结构，根据功能和空间分布的不同，细胞内部可以进一步划分为不同的细胞区域或细胞器，即亚细胞，其结构一般只有在电子显微镜(ems)下才能看到。它们的特点是在细胞内，功能和空间相互隔离，又共同协调维持完整的细胞功能。在一定范围内，亚细胞结构等同于细胞器，不过像细胞膜虽然可以叫亚细胞结构，但不是细胞器。每种亚细胞结构中都存在一组特定的蛋白质，亚细胞结构为这些蛋白质行使功能提供了相对独立的生命活动场所。同时也只有在相同或相近的亚细胞位置上蛋白质间才会有相互作用。
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